柱后衍生-高效液相色譜法測定化妝品中游離甲醛含量
一、范圍
化妝品目前已成為大多數人生活中必不可少的一部分，它的成分安全也因引起了很大的關注。本方法采用了柱后衍生-高效液相色譜法測定化妝品中游離甲醛含量。本方法適用于水劑、膏霜乳液、凝膠類化妝品中(烏洛托品除外)游離甲醛含量的測定。
二、方法提要
樣品中的游離甲醛經高效液相色譜分離，柱后衍生，在420nm波長下檢測，根據保留時間定性，峰面積定量，以標準曲線法計算含量。取0.2g 樣品時，本方法對游離甲醛的檢出濃度為0.003%，最低定量濃度為0.005%。
柱后衍生-高效液相色譜法測定化妝品中游離甲醛含量
三、試劑和材料
所用試劑均為分析純或以上規格，水為GB/T6682 規定的一級水。
1.甲醛標準物質水溶液，使用前要進行標定(標定要用到的的硫代硫酸鈉標準溶液需提前兩周配置)。
2.磷酸
3.乙酸銨
4.冰乙酸
5.乙酰丙酮
6.二氯甲烷
7.磷酸溶液：在容量瓶中加入998mL水，移取2mL磷酸緩緩加入水中，混勻。
8.柱后衍生溶液：稱取62.5g乙酸銨放入容量瓶中，移取7.5mL冰乙酸和5mL乙酰丙酮到容量瓶中，加水至1000mL定容，搖勻。在25℃密封避光保存，該溶液有效使用期3天。
9.甲醛系列標準溶液：用移液槍精密量取甲醛標準物質水溶液適量，用磷酸溶液稀釋成 1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL 的標準系列溶液。現用現配。
四、 儀器和設備
1.高效液相色譜儀，具有二極管陣列檢測器。
2.柱后衍生儀。
3.天平。
4.離心機。
5.渦旋振蕩器
五、分析步驟
1、樣品前處理
稱取樣品0.2g(精確至0.001g)放入10mL具塞比色管中，加磷酸溶液至刻度，渦旋處理1分鐘，在5000轉/分的速度下離心5min，提取上清液，經過0.45μm微孔濾膜過濾，濾液作為待測溶液，并盡快測定。
必要時，可以取上清液加入10mL二氯甲烷，振搖，靜置分層后取出上層溶液經0.45μm微孔濾膜過濾，將濾液作為待測溶液。
甲醛標準物質水溶液標定：
⑴、試劑和材料
所用試劑均為分析純或以上規格，水為GB/T6682規定的一級水。
1硫酸
2氫氧化鈉溶液：稱取氫氧化鈉4g置容量瓶中，用少量水溶解，再加水至100mL定容，混勻。
3 硫酸溶液①：移取硫3mL硫酸，緩慢加入到有97mL水的容量瓶中，混勻。
4 硫酸溶液②：移取10mL硫酸，緩慢加入到90mL水的容量瓶中，混勻。
5 淀粉溶液：稱取可溶性淀粉1g，加入5mL水調成溶液后，加入95mL沸水，煮沸，后加入氯化鋅0.4g防腐。
6 碘標準溶液：稱取碘13.0g和碘化鉀35g放入大燒杯中，加入100mL水，溶解后滴入3滴鹽酸，用水稀釋至1L，過濾后轉移至棕色瓶中。
7 重鉻酸鉀標準溶液[c(1/6K2Cr2O7)]：準確稱取在120℃干燥到恒重的重鉻酸鉀基準物質4.9031g與大燒杯中，加水溶解后，轉移至1L容量瓶中定容，搖勻。
8 硫代硫酸鈉標準溶液：稱取硫代硫酸鈉26g放入有1L新煮沸放冷的水的燒杯中溶解，加入0.4g氫氧化鈉，搖勻，轉移到棕色玻璃瓶內儲存起來，放置兩周后過濾。過濾后進行標定濃度：準確量取重鉻酸鉀標準溶液25.00mL放入500mL碘量瓶中，加入2.0g碘化鉀和20mL硫酸溶液②后，立即密塞，搖勻，于暗處放置10min。再加入150mL水，用硫代硫酸鈉溶液滴定至溶液顯淺黃色時，加入2mL淀粉溶液，繼續滴定至溶液顏色由藍色變為亮綠色。同時做空白試驗。并且計算硫代硫酸鈉溶液的濃度：
c(Na2S2O3)=c(K2Cr2O7)×25.00/(V1?V0)
式中：c(Na2S2O3)——硫代硫酸鈉標準溶液的濃度，mol/L;
c(K2Cr2O7)——重鉻酸鉀標準溶液的濃度[c(1/6K2Cr2O7)]，mol/L;
V1——滴定重鉻酸鉀消耗硫代硫酸鈉溶液的體積，mL;
V0——滴定空白消耗硫代硫酸鈉溶液的體積，mL。
⑵、標定
準確量取甲醛標準物質水溶液適量(相當于甲醛10～20mg)于250mL碘量瓶中，加入50.00mL碘標準溶液，5mL氫氧化鈉溶液，加塞，搖勻放置15min，再加入20mL硫酸溶液①，立即塞緊，混勻，于暗處放置15min，用硫代硫酸鈉標準溶液滴定至溶液顯淡黃色時，加入2mL淀粉溶液，繼續滴定至溶液的藍色剛好褪去，記錄消耗硫代硫酸鈉標準溶液的體積。同時做空白試驗。并計算甲醛的濃度：
ρ(HCHO)=(V0?V1)×c×15×1000/V
式中：ρ(HCHO)——甲醛溶液的濃度分數，mg/L;
V——甲醛標準儲備液取樣體積，mL;
V0——滴定空白溶液消耗的硫代硫酸鈉標準溶液體積，mL;
V1——滴定甲醛溶液消耗的硫代硫酸鈉標準溶液體積，mL;
c——硫代硫酸鈉溶液的摩爾濃度，mol/L;
15——甲醛(1/2HCHO)摩爾質量，g/mol。
2、色譜參考條件
色譜柱：C18 色譜柱(250×4.6mm×5μm);
流動相：磷酸溶液;
流速：1.0mL/min;
柱溫：20℃;
檢測波長：420nm;
進樣體積：10μL;
柱后衍生溶液流速：0.5mL/min;
衍生溫度：100℃。
3、測定
在上述色譜條件下，取甲醛系列標準溶液各10μL分別進樣，進行液相色譜分析，以系列標準溶液濃度為橫坐標，甲醛衍生物的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，方程為Y=77.47X+34.89，相關系數為0.9999。
取處理得到的待測溶液進樣10μL，進行色譜分析，根據保留時間和光譜圖定性，測得甲醛衍生物的峰面積，根據標準曲線得到待測溶液中游離甲醛的質量濃度。最后計算樣品中游離甲醛的含量。若樣品中游離甲醛含量超過0.05%時，可采用液相色譜-三重四級桿質譜進行確證。若樣品游離甲醛含量未超過0.05%，則不需要這一步。
六、分析結果的表述
1、計算
式中：(游離甲醛)——化妝品中游離甲醛的含量，%;
m——樣品取樣量，g;
ρ——代入標準曲線計算得到的樣品中甲醛的質量濃度，μg/mL;
V——定容體積，mL。
在重復性條件下獲得的兩次獨立測試結果的絕對差值均不超過算術平均值的 5%。
2、回收率和精密度
回收率為96.8% ～ 108.9%，相對標準偏差均小于3%。
甲醛(4.542min)
八、樣品確證
1、 樣品處理
稱取樣品0.2g(精確至0.001g)于10mL具塞比色管中，加五氟苯肼溶液(稱取五氟苯肼1.0g，放入1000mL容量瓶中，用磷酸溶液溶解并定容，搖勻。)至刻度，渦旋處理1分鐘，5000rpm 離心5min，取上清液經0.22μm微孔濾膜過濾，取濾液作為待測溶液，立即測定。另取甲醛標準溶液(與樣品中游離甲醛的量相當)于10mL 具塞比色管中，同法處理。
2 、液相色譜-質譜法參考條件
色譜參考條件：
色譜柱：C18柱(2.1mm×150mm×3.5μm);
流動相A：水;
流動相B：乙腈;