液相色譜的這些概念，你可一定要分清
2022-09-14 14:10
高效液相色譜（HPLC）是一門基礎分析學科，有許多名稱相似的概念。今天蘭博就帶大家區分一些易混淆的常見液相色譜概念。
1、水峰&倒峰
要知道，在液相色譜中，水出峰通常是作為溶劑出峰，因此在出峰的時間上通常都是位于溶劑峰的位置（0~5min之間）。峰形上，相比于其他有機溶劑的溶劑峰，水峰多表現為明顯的基線波動，甚至為倒峰。
而色譜分析中的倒峰則不僅僅局限于水溶劑峰，因此倒峰可能在色譜分析的任何位置出峰。這種情況下，引起倒峰的原因多為在此波長下有造成負吸收的雜質通過檢測器，或更有甚者，檢測器的電極接反了。
2、溶劑峰&空白峰
溶劑峰，顧名思義就是溶解樣品溶劑出的峰。如樣品用甲醇溶解，單獨進甲醇溶劑的峰即是溶劑峰。
空白峰和溶劑峰這兩個概念經常被分析工作者混淆，但嚴格來說，空白峰指的是樣品基質本底的出峰情況（即空白基質樣品），并不僅僅指溶劑峰。若是簡單的小分子極性化合物，溶劑峰和空白峰在譜圖上通常無較大區別；而若是蛋白、食品等基質本底干擾不可忽略的樣品，空白峰往往比溶劑峰要復雜。
3、進溶劑空白&進空針
既然講到了空白峰，那就不得不多說一句。我們在進行常見色譜峰異常問題排查的過程中，經常需要尋找異常峰的來源，這時就經常要進行兩個步驟：
1、進空針；
2、進溶劑空白。這兩步的概念千萬不可混淆。進溶劑空白很好理解，指進空白溶劑；進空針指的是儀器空運行一針，相當于運行一針流動相，不是指進空白溶劑，也不是指拿下色譜柱接兩通進樣。
若色譜運行過程中出現異常峰，建議各位老師按照先進空針，再進溶劑空白的順序排查。若進空針無異常，進溶劑空白也無異常，說明異常峰來源于樣品本身（基質本底）；若進空針無異常，進溶劑空白有異常，說明異常峰來源于溶劑空白；若進空針有異常，說明異常峰來源于系統污染（包括儀器、管路、進樣系統、流動相），或色譜柱污染。
4、鬼峰&干擾峰
鬼峰(Ghostpeak)：是對未知來源的色譜峰的統稱。色譜分離過程中，特別是在梯度洗脫或者儀器使用時間過久容易產生時有時無的色譜峰，因此鬼峰最大的特點就是“飄忽不定”，“神出鬼沒”，這種特性通常體現在保留時間不穩定和峰面積不穩定上。鬼峰的來源有很多，但流動相梯度變化產生的鬼峰是最棘手，也最常見的。
而干擾峰因為已經知道是來源于污染物的干擾，因此干擾峰與鬼峰最大的區別就是干擾峰往往出峰時間較為固定（有時候峰面積甚至都沒太大變化）。因此面對干擾峰，我們就從色譜柱污染、樣品污染、試劑污染、流動相污染這幾個方面來排查就好了。
5、重復性&重現性
重復性（repeatability）與重現性（reproducibility）都是用來評價分析結果的精密度，二者都是用分析結果的RSD值來表示，但二者的實際意義是不一樣的。
重復性：是指同一分析人員在同樣實驗環境下，相同實驗條件所得的分析結果的精密度；
重現性：是指不同分析人員或不同實驗室，在各自的實驗環境下，相同實驗條件所得的分析結果的精密度；
相比重復性，重現性提出了更高的精密度要求。重復性好，重現性未必好；而重現性好，重復性則一定好。對現代儀器分析而言，重復性是容易實現的，而重現性的實際意義更大，也是方法驗證所必須考察的。
6、柱床塌陷&相塌陷
柱床塌陷又叫填料塌陷，是指色譜柱使用一段時間后色譜柱入口處的柱床產生可見的空隙。該空隙的存在增大了死體積，會導致色譜柱柱效下降。造成柱床塌陷的原因如下：
一，色譜柱填裝時的壓力過低，填裝不緊密，在高壓下使用一段時間，開始出現空隙；
二，操作壓力超出色譜柱填料的耐壓值，導致填料顆粒破碎產生空隙；
三，極端流動相（如pH>8.0）溶解填料導致空隙出現；
四，極端流動相（如pH<1.5）使得鍵合相脫落，填料松動；
鍵合相塌陷是指由于流動相極性與鍵合相極性相差太大，鍵合相無法在流動相中充分伸展而倒伏、纏結在一起，比如普通C18在高比例水相條件下。相塌陷會導致色譜柱對化合物的保留不足。單純的相塌陷不會導致柱床填料的損壞，且通常可恢復。
(a)在甲醇水流動相下的碳鏈形狀
(b)100%水流動相下的碳鏈形狀
以上是我們在進行高效液相色譜實驗中常易產生混淆的概念。HPLC技術如今已廣泛應用與食品、醫藥、化工等領域，注意理清基本概念將極大程度幫助我們節省分析成本。